Z6尊龙凯时

洋葱伯克霍尔德氏菌复合体（BCC）可能在低营养环境和恶劣前提下维持存活，对非无菌药品组成传染风险，且难以检测
。BCC分离株是传染无菌和非无菌药品的一些最常见的微生物，最近发作的几次习染与被发现的含有BCC的防腐剂有关
。含水产品尤其危险，由于BCC可能在恶劣前提下维持活力，蕴含防腐剂的存在
。本钻研的主张是评估使用寡营养造就基的BCC，与使用TSA或TSB在分歧的无菌蒸馏水样品中保留温度以及分歧的防腐剂浓度下的复原情况，并进行比力
。因而推荐这篇文章给各人，但愿能对各人有所援手
。

Oligotrophic Media Compared with a Tryptic Soy Agar or Broth for the Recovery of Burkholderia cepacia Complex from Different Storage Temperatures and Culture Conditions

内容

提要：洋葱伯克霍尔德氏菌菌群（BCC）可能在低营养环境和恶劣前提下维持存活，对非无菌药品组成传染风险，并对检测组成挑战
。为了成立检测BCC的最佳回收步骤，我们对三种寡营养造就基进行了评价，并用营养造就基从高压蒸馏水或防腐溶液中回收BCC进行了比力
。将20株BCC菌株陆续稀释后（10^-1~10^-12 CFU/ml）接种到高压蒸馏水中，在6℃、23℃和42℃前提下保留42天
。用6种洋葱伯克霍尔德氏菌悬液接种含5 μg/ml和50 μg/ml氯己定葡萄糖酸酯（CHX）和10 μg/ml苯扎氯铵（BZK）的水溶液，并在23℃再贮存199天
。营养造就基，如胰蛋白酶大豆琼脂（TSA）或胰蛋白酶大豆肉汤（TSB），少营养造就基(1/10强度的TSA或TSB，R2A或R2AB，和1/3强度R2A或R2AB，使用这些造就基接种从高压蒸馏水和防腐样品的BCC
。液体造就基中BCC（水中或防腐剂中）的回收率高于固体造就基
。寡营养造就基对20株BCC样品的回收效能高于TSA或TSB
。多沉比力的了局使我们可能直接鉴别TSA或TSB与寡营养造就基之间的显著差距
。美国药典（USP）提出的BCC检测的单一检测步骤提供了一种寡营养造就基预富集复苏步骤
。

资料和步骤：

寡造就基的造备：

了局：

分歧贮存温度下TSB和R2AB的成长动力学：为了相识温度对存活的影响，将20株BCC在3种温度（6℃、23℃和42℃）下保留42天，并在分歧的造就基中复原
。综合了局，在6℃、23℃和42℃下观察到存活，没有发现物种特异性的趋向
。当造就基接种初始浓度为10²-10⁰ CFU/ml（在蒸馏水6℃和23℃保留42天），10⁸-10⁶ CFU/ml（在蒸馏水42°C保留42天时），观察到洋葱AU19236的成长
。在TSB、1/10×TSB、R2AB和1/3×R2AB中观察了AU19236在30℃造就24 h后的成长，并使用Baranyi模型描述了动力学
。接种TSB、1/10×TSB、R2AB和1/3×R2AB的AU19236拟合的成长曲线均匀r²值为> 0.98
。由于回归线与观测数据点近似，因而在均匀成长曲线中得到了较高的r²值
。在6℃保留的蒸馏水中造就，显示出更长的滞后功夫（λ），领域在17.6-27.4h之间（图1A）
。在23℃和42℃（别离为10.1和14.2h）下估计的滞后功夫没有显著差距（1B和1C）
。在6℃和23℃时，1/10×TSB、R2AB和1/3×R2AB的滞后功夫值（λ）大于TSB，但在42℃时，滞后功夫值不大
。此表，无论使用何种造就基成长快率(μ)没有显著差距（p > 0.05），只管寡营养的成长造就基（如1/10×TSB,R2AB和1/3×R2AB在23℃和42℃）增长率更大
。

分歧贮存温度下TSA与寡营养固体造就基比力：为了评估固体造就基中的活菌落计数，使用ProtoCOL3自动平板计数器对每个平板进行计数
。

经过42天的造就，在6°C（10⁴-10⁸ CFU/ml）和23°C（10⁷-10¹² CFU/ml）的浓度下，所有的琼脂都很容易复原
。然而，在42°C（10²-10⁶ CFU/ml）的蒸馏水中当20株BCC菌株被接种在固体造就基上时，只有8株BCC菌株42天后成长
。其余菌株造就9天后没有在固体造就基上成长
。

在6°C贮存42天后，所有琼脂的回收率约为10⁴ -10⁸ CFU/ml
。B. lata HI4002，B. cenocepacia HI2976 和 B. cenocepacia HI2485 为BCC菌株，菌落计数较高，达到10⁸ CFU/ml
。1/3×R2A（1.79 ± 6.81×10⁸ CFU/ml）和R2A（1.95 ± 7.31×10⁸ CFU/ml）的菌落计数略高于TSA（1.67 ± 6.41×10⁸ CFU/ml）的菌落计数
。选取Mann-Whitney Rank Sum Test比力TSA与1/10×TSA、1/3×R2A和R2A之间的差距，差距无统计学意思（p < 0.05）
。在23°C的蒸馏水中，在各类造就基上，10¹² CFU/ml BCC的初始浓度维持不变
。1/10×TSA（4.18 ± 6.17×10¹² CFU/ml）、1/13×R2A（4.17 ± 5.62×10¹² CFU/ml）和R2A（4.46 ± 5.78×10¹² CFU/ml）的菌落计数均高于TSA（3.44 ± 5.09×10¹² CFU/ml）
。选取Mann-Whitney Rank Sum Test比力TSA与R2A的差距，发现差距有统计学意思（p < 0.041）
。

在42°C时，只有8株菌株成长到约10⁵ CFU/ml
。1/10×TSA（2.01 ± 4.17×10⁵ CFU/ml）、1/3×R2A（6.56 ± 15.05×10⁵ CFU/ml）和R2A（6.53 ± 14.72×10⁵ CFU/ml）的菌落数量比TSA（0.57±1.39±1.39×10⁵ CFU/ml）更高
。选取Mann-Whitney Rank Sum Test比力TSA与寡营养造就基的差距，如1/10×TSA（p = 0.008）、1/3×R2A（p < 0.001）和R2A（p < 0.001）
。

分歧贮存温度下TSB和寡营养肉汤造就基的比力：对TSB、1/10×TSB、1/3×R2AB和R2AB肉汤造就基在6°C、23°C和42°C下复原BCC的能力进行了评估
。

     在6°C存储时，与1/10×TSB、1/3×R2AB和R2AB相比，TSB介质中的回收效能较低，回收率别离为351/480（回收次数/测试次数）、345/480和353/480
。对接种的菌落数最低（10^-12）的4个肉汤的评价批注，1/10×TSB、1/3×R2AB和R2AB支持从23°C存储中回收BCC
。在480次试验中，别离有39、94、94、107、79个TSB、1/10×TSB、1/3×R2AB和R2AB造就基中BCC的回收率存在差距
。统计分析显示，TSB的有效性低于1/10×TSB
。

CHX和BZK的复原

TSA和稀释固体造就基在分歧浓度的防腐剂下的比力：将6株菌株悬浮在5和50 μg/ml CHX或10 μg/ml BZK中
。在5和50 μg/ml的CHX溶液中，1/10×TSA（7.06 ± 6.5×10⁴ CFU/ml，3.73 ± 3.93×10³ CFU/ml）的菌落计数略高于TSA（6.59 ± 5.12×10⁴ CFU/ml，3.03 ± 3.42×10³ CFU/ml），别离如下图：

    选取Mann-Whitney Rank Sum Test比力TSA与1/10×TSA的差距，两组间差距无统计学意思(p < 0.05)
。此表，在10 μg/mlBZK溶液中，1/10×TSA（1.51 ± 1.77×103 CFU/ml）、1/3×R2A（1.58 ± 1.73×103 CFU/ml）、R2A（129±2.24×103 CFU/ml）的菌株数量别离略高于TSA（1.27 ± 1.28×103 CFU/ml）
。

分歧浓度防腐剂下TSB和少营养肉汤造就基的比力：对TSB、1/10×TSB、1/3×R2AB和R2AB肉汤造就基在5和50 μg/ml CHX或10 μg/ml BZK中复原BCC的能力进行评价
。在R2AB介质中复原效能更高，复原数量别离为134/144（复原次数/试验次数，从5 μg/ml of CHX）、114/144（50 μg/ml of CHX）和113/144（10 μg/ml of BZK）
。

    数据统计分析显示，TSB和R2AB的CHX的5μg/ml（χ2统计= 6.9231，p = 0.0085）、50 μg/ml的CHX（χ2统计= 9.8223，p = 0.0017）和10 μg/ml的BZK（χ2统计= 31.3481，p < 0.05）之间存在显著差距
。

会商：

洋葱伯克霍尔德氏菌复合体（BCC）可能在低营养环境和恶劣前提下维持存活，对非无菌药品组成传染风险，并对检测组成挑战
。为了成立检测BCC的最佳回收步骤，作者对三种寡营养造就基进行了评价，并与营养造就基从高压蒸馏水或防腐溶液中回收BCC进行了比力
。将20株BCC菌株陆续稀释后（10^-1~10-¹² CFU/ml）接种到高压蒸馏水中，在6℃、23℃和42℃前提下保留42天
。用6种洋葱伯克霍尔德氏菌悬液接种含5 μg/ml和50 μg/ml氯己定葡萄糖酸酯（CHX）和10 μg/ml苯扎氯铵（BZK）的水溶液，并在23℃再贮存199天
。营养造就基，如胰蛋白酶大豆琼脂（TSA）或胰蛋白酶大豆肉汤（TSB），少营养造就基(1/10强度的TSA或TSB，R2A或R2AB，和1/3强度R2A或R2AB)通过接种高压蒸馏水和防腐样品的BCC到造就基中
。肉汤造就基中水中或防腐剂中BCC的回收率高于固体造就基
。寡营养造就基对20BCC样品的回收效能高于TSA或TSB
。多沉比力的了局使我们可能直接鉴别TSA或TSB与寡营养造就基之间的显著差距
。